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| CD11b-BFP融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定 |
| 严鸣;毛积芳;钟纪根;何建;朱秋峰;娄淑杰;徐仁宝 |
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| (第二军医大学基础医学部病理生理学教研室,基础医学部生物化学与分子生物学教研室 ,第二军医大学基础医学部病理生理学教研室,长海医院急救科 ,长征医院麻醉科 ,基础医学部神经生物学教研室 ,第二军医大学基础医学部病理生理学教研室 上海200433 ,上海200433 ,上海200433) |
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| 摘要: |
| 目的 :构建并表达巨噬细胞分化抗原 1(Mac- 1)的 α链 CD11b与蓝色荧光蛋白 (BFP)的融合蛋白 CD11b- BFP,为进一步直视研究 Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将 CD11b的全长 c DNA进行酶切并获得 2个片段 ,将其中含有终止密码的片段作为模板 ,通过设计引物进行 PCR,获得不含有终止密码的该片段 ,然后与另一片段进行连接 ,形成不含有终止密码的 Mac- 1全长 c DNA,将其插入到表达载体 p EBFP- N1中 ,构建完成 CD11b- BFP融合基因 ,最后将其转染至 U937细胞株中 ,通过荧光显微镜观察与流式细胞术检测 Mac- 1的表达及其黏附活性来进行鉴定。 结果 :经酶切鉴定 ,p CD11b- BFP构建完全正确 ,转染 U937细胞株后 ,可见 CD11b- BFP融合蛋白发出的蓝色荧光。 结论 :构建完成 CD11b-BFP融合基因并在 U937细胞株中进行表达 |
| 关键词: 巨噬细胞分化抗原1 蓝色荧光蛋白 融合蛋白 |
| DOI： |
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