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| 核转录因子κB RNA适体重组腺病毒载体的构建 |
| 游兴姬;杨生生;蔡在龙;张志珍;焦炳华;毛积芳 |
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| (第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室 上海200433 ,上海200433 ,上海200433 ,上海200433 ,上海200433 ,上海200433) |
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| 摘要: |
| 目的 :构建核转录因子 κB(NF- κB) RNA适体 (aptamer)重组腺病毒载体 p Adeasy- aptamer,制备重组腺病毒 Ad- ap-tam er并测定其活性。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 aptamer c DNA的 6个寡核苷酸片段并拼接完整 ,克隆至 p GEM- 7Z载体中 ,经酶切鉴定和测序后把 aptam er c DNA定向插入穿梭质粒 p Shuttle- CMV的多克隆位点上 ,再将重组质粒 p Shuttle- CMV-aptamer与腺病毒载体 p Adeasy在大肠杆菌 BJ5 183中同源重组产生重组腺病毒载体 p Adeasy- aptam er。用脂质体转染p Adeasy- aptam er至 HEK2 93细胞 ,产生有感染能力的重组腺病毒 Ad- aptam er,RT- PCR检测重组腺病毒在感染细胞中的表达 ,并测定其对体外抑制炎症细胞系释放炎症介质 IL- 1β和 IL- 6的影响。 结果 :感染重组腺病毒的细胞具有 aptamer c DNA的表达 ,重组腺病毒能抑制感染细胞炎症介质的释放 ,具有预期的生物学活性。结论 :产生具有生物学活性的重组腺病毒 Ad-aptamer,为下一步基因治疗因 NF- κB过度激活引起的急慢性炎症反应奠定基础 |
| 关键词: 核转录因子κB RNA适体 重组腺病毒载体 |
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