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目的:采用反相高效液相色谱(RP—HPLC)内标法测定培养的猪肝细胞利多卡因浓度,以初步评价球体培养的猪肝细胞利多卡因代谢功能。方法:采用原位胶原酶循环灌注法分离猪肝细胞,以1×10^7/ml密度接种至无血清培养基中,分别采用球体培养法和贴壁培养法培养0~7d。分别于培养0、1、3、5、7d在培养液中加入利多卡因100ng/ml。用锥虫蓝拒染试验检测培养肝细胞的活率;在倒置显微镜下观察肝细胞形态;采用RP—HPLC内标法测定培养24h后上清液中利多卡因浓度。结果:培养3~7d,球体培养组肝细胞活率高于贴壁培养组(P%0.05)。球体培养24h后80%~90%的肝细胞形成多细胞球形聚集体。培养1~7d,球体培养组利多卡因浓度低于贴壁培养组(P〈0.05);两组在培养第3天时利多卡因浓度最低。结论:RP—HPLC内标法可用于测定培养的猪肝细胞利多卡因浓度,方法灵敏、准确、快速。高密度下球体培养猪肝细胞利多卡因代谢功能高于贴壁培养,以培养第3天为最强。[著者文摘] |
关键词: 肝 人工 肝细胞 细胞培养技术 利多卡因 |
DOI:10.3724/SP.J.1008.2006.01377 |
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基金项目:江苏省卫生厅重大项目资助课题(BQ200020);江苏省高校“青蓝工程”中青年学术带头人培养基金资助课题. |
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Determination of lidocaine metabolism capacity in cultured porcine hepatocyte spheroids by RP-HPLC with internal standard |
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