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人MCPH1基因shRNA逆转录病毒载体的构建及鉴定
袁成福,程莉,黄秀凝,卜友泉,刘革力,宋方洲*
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(重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆 400016)
摘要:
目的:建立逆转录病毒介导的MCPH1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MCPH1表达的影响。方法: 将人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段重组到逆转录病毒质粒pSilencer5.1-H1 Retro中,构建携带人MCPH1基因RNA干扰逆转录病毒载体pSiRNA-MCPH1,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选产生稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western印迹检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白表达的变化。结果:重组pSiRNA-MCPH1质粒经测序鉴定正确;重组逆转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western印迹检测人MCPH1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论:携带人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段的逆转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MCPH1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。
关键词:  MCPH1  RNA干扰  逆转录病毒载体  宫颈肿瘤
DOI:10.3724/SP.J.1008.2009.0450
投稿时间:2008-11-06修订日期:2009-02-12
基金项目:国家自然科学基金(30800410).
Construction and identification of recombinant retroviral vector expressing shRNA targeting human MCPH1 gene
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Abstract:
Key words: