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亲环素A的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备
张慧珍*,王钧,金蕾,吴逸明
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(郑州大学公共卫生学院,郑州 450001)
摘要:
目的 构建人亲环素A(CypA)基因的原核表达载体,诱导表达、纯化蛋白,制备抗体,为进一步研究其生物学作用奠定基础。方法 以人肺癌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增CypA基因片段,克隆到pMD18-T载体中。扩增产物与原核表达载体pET30a(+)连接,构建表达质粒pET30a-CypA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍树脂亲和层析柱High-Affinity Ni-IDA Resin纯化表达产物,SDS-PAGE 检测纯化蛋白。用获得的蛋白免疫大白兔,制备抗CypA蛋白多抗,采用蛋白印迹法检测抗体特异性。结果 成功构建了CypA的原核表达载体,经大肠杆菌诱导表达、镍亲和层析柱纯化,得到纯度达80.2%的融合蛋白,免疫大白兔后得到多抗血清。蛋白印迹结果显示此多克隆抗体能与CypA蛋白特异性结合。结论 成功获得CypA纯化蛋白及CypA多克隆抗体,为进一步研究CypA在肺癌中的作用机制奠定了基础。
关键词:  亲环素A  原核表达  分离纯化  亲和层析  多克隆抗体
DOI:10.3724/SP.J.1008.2010.0445
投稿时间:2009-03-17修订日期:2010-01-21
基金项目:
Prokaryotic expression, purification and polyclonal antibody preparation of Cyclophilin A
(College of Public Health,Zhengzhou University)
Abstract:
Key words: