【打印本页】 【下载PDF全文】 【HTML】 查看/发表评论下载PDF阅读器关闭

←前一篇|后一篇→

过刊浏览    高级检索

本文已被:浏览 2819次   下载 3301 本文二维码信息
码上扫一扫!
烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶的表达、纯化及活性测定
吕小群,张偌瑜,徐学文,管云枫,缪朝玉*
0
(第二军医大学药学院药理学教研室,上海 200433)
摘要:
[摘要]目的获得具有较高纯度和酶活性的烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶-1(Nmnat1),为进一步对其功能及调控的研究奠定基础。方法在大肠杆菌中进行Nmnat1表达的条件优化,采用Ni-NTA 亲和层析法对目的蛋白进行纯化,并通过酶联荧光法测定酶活性。结果BL21-CondonPlus (DE3)-RIL为适宜的宿主菌,优化的蛋白表达条件为: 在2×YT培养基(37 μg/ml氯霉素和75 μg/ml卡那霉素)中于28℃、0.5 mmol/L IPTG(isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导8 h。纯化获得的Nmnat1蛋白具有较高的纯度和酶活性。结论适宜的宿主菌对Nmnat1蛋白的高效表达至关重要,进行表达条件优化后可获得大量具有较高纯度和酶活性的目的蛋白。
关键词:  烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶  表达  纯化  酶活性
DOI:10.3724/SP.J.1008.2010.01251
投稿时间:2010-04-20修订日期:2010-09-12
基金项目:国家重点基础研究发展计划课题(“973计划 ”,2009CB521902),国家“重大新药创制”科技专项(2009ZX09303-002),上海市优秀学科带人计划(10XD1405300),上海市血管生物学重点实验室开放课题基金(GXY2009001001).
Expression, purification, and enzymatic activity assay of nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase
L Xia-qun,ZHANG Ruo-yu,XU Xue-wen,GUAN Yun-feng,MIAO Chao-yu
(Department of Pharmacology,School of Pharmacy,Second Military Medical University,Shanghai 200433)
Abstract:
Key words: