【打印本页】 【下载PDF全文】 【HTML】 查看/发表评论下载PDF阅读器关闭

←前一篇|后一篇→

过刊浏览    高级检索

本文已被:浏览 2329次   下载 1810 本文二维码信息
码上扫一扫!
Smurf1基因靶向RNAi 慢病毒载体的构建及转染
袁恒锋,何崇儒,高金巍,徐卫东*
0
(第二军医大学长海医院骨科,上海 200433
*通信作者)
摘要:
目的 构建Smad泛素调节因子1 (Smurf1) 基因的RNA干扰( RNAi) 慢病毒表达载体,观察其转染骨肉瘤U20S细胞后对Smurf1基因表达的抑制作用,为后续研究奠定基础。方法 构建Smurf1 基因过表达质粒,同时针对Smurf1基因序列设计合成4 条RNAi片段并构建RNAi 慢病毒载体。过表达质粒和RNAi 质粒共转染293T细胞后应用Western印迹法进行外源筛靶,筛靶出成功的干扰质粒PSC2939。用慢病毒包装PSC2939后感染U20S细胞,进行内源验证,荧光定量PCR和Western印迹检测U20S细胞中Smurf1 mRNA及蛋白的表达。结果 经PCR及测序证实,Smurf1基因过表达载体及4种干扰载体均成功构建;Western 印迹外源筛靶显示,PSC2939干扰载体能有效敲减目的基因的表达;慢病毒包装后的PSC2939干扰载体能有效抑制U20S细胞中Smurf1蛋白的表达,对Smurf1 mRNA的抑制率达到60%以上。结论 成功构建可供感染的Smurf1 基因RNAi 慢病毒载体,为进一步研究Smurf1基因在骨肉瘤细胞中的作用提供了有效的实验工具。
关键词:  RNA 干扰  Smurf1  骨肉瘤  慢病毒属
DOI:10.3724/SP.J.1008.2011.01147
投稿时间:2011-02-08修订日期:2011-07-25
基金项目:上海市基础研究重点项目(08JC1406700).
Construction of recombinant lentiviral vector of RNAi targeting Smurf1 gene and its expression in U20S cells
YUAN Heng-feng,HE Chong-ru,GAO Jin-wei,XU Wei-dong*
(Department of Orthopaedics,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China
*Corresponding author.)
Abstract:
Key words: