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| 【立论依据】 根据活化状态及功能,巨噬细胞主要分为M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞。不同组织中的巨噬细胞具有不同的膜表面抗原及受体, 对于来源于同一种组织不同区域的巨噬细胞,其表型也具有明显的差异性,这证实了局部微环境对巨噬细胞表型的影响。本课题组的前期工作发现, 经腹腔注射LPS的小鼠腹腔巨噬细胞与体外LPS处理的腹腔巨噬细胞在形态及吞噬杀菌能力上存在明显差异,提示微环境对巨噬细胞的吞噬能力有显著影响。 【设计思路】 巨噬细胞吞噬功能差异与亚细胞结构之间的联系;巨噬细胞吞噬功能差异与其分型之间的联系;微环境与巨噬细胞分型及吞噬能力之间的联系。 【实验内容】 分别取未进行预处理、在体和离体LPS预处理后腹腔巨噬细胞进行形态学比较和亚细胞结构观察,检测吞噬和杀菌能力,并用抗体标记其表面分子,利用流式细胞仪,检测吞噬能力与分型之间的关系;分别用LPS/IFN-γ和IL-4诱导出M1型、M2型巨噬细胞,观察细胞形态并检测其吞菌和杀菌能力;分别取正常小鼠和腹腔注射LPS预处理24 h小鼠的腹腔灌洗液、体外经LPS预处理后腹腔巨噬细胞培养液上清进行细胞因子检测。 【材料】 6~8 周的C57小鼠;流式细胞仪、荧光倒置显微镜、标准细胞间及相关细胞培养等仪器设备;IL-4、LPS、胞培养基等试剂。 【可行性】 本实验设计思路清晰,逻辑性强,实验方法成熟。所在实验室拥有流式细胞仪等相应的仪器设备,具备完成实验的所有条件;前期已有一定实验结果,为实验的实施打下良好的基础 【创新性】 巨噬细胞的分型是最近炎症免疫相关研究的热点。现阶段对其分型的研究多集中在表面抗原与受体方面,对分型与吞噬能力之间的关系却少有研究。本实验通过对不同微环境中的巨噬细胞进行研究,探索其吞噬能力的差异与分型的关系,期望能从一个新的角度来阐述微环境对巨噬细胞杀菌能力的影响,为临床防治感染提供全新的思路与方向。 |
| 关键词: M1/M2型巨噬细胞 LPS 微环境 吞噬 |
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