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| 【立论依据】 缝隙连接(GJ)是目前认为相邻细胞间唯一能直接进行能量、物质和信息交换的一种特殊通道。缝隙连接43(Connexin 43, Cx43)是睾丸中主要的缝隙连接蛋白,存在于Sertoli cell、Leydig cell、精原细胞和精母细胞。原位染料偶联实验研究显示,在精子发生过程中,Leydig cell 之间、Sertoli cell 之间以及Sertoli cell 和精原细胞、精母细胞之间的缝隙连接起着重要的局部调节作用。 【设计思路】 采用免疫组化和图像分析技术,观察大鼠出生后不同周龄睾丸组织中Cx43的表达状况和加龄变化,利用血细胞计数板检测精子百分率和活力,探讨缝隙连接蛋白与精子发生的相关性。 【实验内容】 雄性SD 大鼠42 只,分为1、3、5、7、9、11、13 周龄组,每组6 只。断颈处死各周龄大鼠,取1~13 周龄双侧睾丸,Bouin 液固定24 h,常规石蜡包埋、切片,免疫组化检测睾丸Cx43 蛋白的表达,图像分析系统分析Cx43 蛋白表达的积分光密度值。取3~13 周龄双侧附睾,利用血细胞计数板检测精子百分率和活力。采用SPSS 19.0 建立数据库,进行统计学处理,撰写实验报告。 【材料】 SD 雄性大鼠(浙江中医药大学实验动物中心提供)。兔抗大鼠Cx43 单克隆抗体(Santa Cruz 公司),生物素标记羊抗兔IgG 抗体、SABC 免疫组化试剂盒(华美公司,北京)。 【可行性】 绍兴文理学院医学院医学实验中心是浙江省实验示范中心建设单位和绍兴市大学生创新创业实践基地,具备完成该项课题所需要的所有仪器和实验条件。指导教师是浙江省教学名师,指导省、市级学生科研课题8 项,指导学生在一级期刊和核心期刊杂志上发表论文14 篇。课题组成员动手能力较强,获校级基础医学技能操作竞赛奖,较熟练地掌握了免疫组化和图像分析技术。 【创新性】 以Cx43 蛋白为靶点,探讨Cx43 蛋白在大鼠出生后不同周龄睾丸中表达的加龄变化以及与精子发生的相关性。 |
| 关键词: 睾丸 Cx43 蛋白 周龄 精子发生 大鼠 |
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