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| 【立论依据】 成人角膜内皮细胞缺乏增殖能力,损伤后只能由邻近细胞的扩大移行来填补缺损区,当损伤至一定程度时,可导致视力下降直至失明。经本课题组研究首次发现TGF-α既可促进角膜内皮细胞增殖,又可维持其正常功能,提示TGF-α可用于角膜内皮损伤类疾病的治疗。 【设计思路】 阐明TGF-α角膜内皮保护作用的机制,并以此为基础治疗角膜内皮损伤类疾病。 【实验内容】 (1) TGF-α角膜内皮保护作用的机制研究:以原代培养的大鼠角膜内皮细胞制造划痕损伤模型,通过蛋白质印迹实验、免疫荧光染色、实时定量PCR、流式细胞术等方法,①检测TGF-α受体EGFR表达量及其循环途径的改变;②检测其与EGFR结合后下游信号通路的激活;③检测角膜内皮细胞周期时相及相关周期蛋白的变化。(2)TGF-α角膜内皮保护剂体内疗效评价:以超声乳化机建立角膜内皮细胞损伤动物模型,通过不同剂型、剂量的TGF-α进行给药处理,①使用裂隙灯、共聚焦显微镜及内皮细胞计数仪等评估角膜内皮细胞的形态、数量及功能;②以形态学及免疫组化方法检测角膜内皮细胞增殖及功能特异性蛋白表达状况;③以基因芯片的方法检测TGF-α对受损角膜内皮细胞基因表达谱的改变及影响。 【可行性】 (1)理论可行性:本项目指导教师和导师组老师是长期从事眼科研究的资深教授,且本项目已进行部分实验,论据充分。(2)技术保障:本课题技术路线合理成熟,相关手段课题组成员在都已熟练掌握并灵活应用。(3)实验设备保障:项目依托单位为厦门大学眼科研究所,是福建省重点研究室,拥有一批先进的实验设备及相关技师可辅助本课题开展。 【创新性】 (1)本研究首次发现TGF-α可促进角膜内皮细胞增殖,且维持其功能,其作用及机制的研究将有利于深入了解角膜内皮细胞的再生,并可能获得理论上的突破。(2)有关角膜内皮细胞保护剂的研发尚属空白,国内外均未见报导,本课题将提供新的治疗角膜内皮细胞损伤的途径及药物。 |
| 关键词: TGF-α 角膜内皮细胞 增殖 迁移 角膜内皮保护剂 |
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