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| 【立论依据】 丝虫病是一种严重危害人类健康的疾病,全球受威胁人口超过11亿。如何抵御丝虫感染和侵袭,除药物和防蚊外,免疫预防被视为一种重要的具有持效性的措施。本课题以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象,克隆和表达周期型马来丝虫M29编码基因,建立M29基因真核表达体系,进行其表位基因原核及真核表达,重组构建马来丝虫M29表位基因疫苗,并进一步进行免疫学研究应用,筛选新的预防丝虫感染疫苗候选分子,为最终研制开发出具有保护作用的抗丝虫感染基因工程疫苗并进入临床奠定基础。 【设计思路】 进行研究方案及技术路线的自主设计,学习课题中所要求的引物的设计和合成技术,克隆和扩增周期型马来丝虫M29编码基因。通过RT-PCR技术和体外特异性扩增技术,进行马来丝虫M29 表位基因原核及真核的重组质粒构建以及免疫学研究与应用。 【实验内容】 克隆和扩增周期型马来丝虫M29编码基因;构建含目的基因的原核及真核表达质粒;HeLa细胞培养及转染技术实验;周期型马来丝虫M29基因疫苗免疫接种与检测。 【材料】 E.coli DH5α大肠埃希菌,pET-28a(+)载体,pcDNA3.1(+)质粒,试剂盒,限制性内切酶,DNA连接酶,异丙基β-D-硫代半乳糖苷酶,咪唑。 【可行性】 课题研究将在指导教师专用科研实验室进行,备有课题研究所需各种仪器设备,该课题是指导教师科研项目中的子项目,具有前期工作的基础。同学们利用课余时间查阅资料;到实验室进行科研实际操作;由指导教师进行理论和实际操作方面的指导;有实验室在读研究生的实际带教。同学们通过理论学习和实际操作实践掌握相关技术,培养动手能力,按期完成计划项目。 【创新性】 (1)以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象,进行基因工程疫苗的研究。(2)采用先进的哺乳动物HeLa细胞作为真核表达系统,具备完整的蛋白质组装和修饰系统,表达产物的构象接近天然蛋白质。(3)通过设计B细胞表位,进行马来丝虫M29 表位基因疫苗叠加免疫研究。 |
| 关键词: 周期型马来丝虫 肌球蛋白 基因 疫苗 |
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