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| 【立论依据】 原发性肝细胞癌(HCC)是全球第三大致死的肿瘤类型,恶性程度高,预后差。基于本实验室构建的HCC病人癌组织和正常组织的差异表达库,我们筛选到了一系列与HCC相关的差异表达蛋白,其中包括KIAA0101蛋白。KIAA0101与DNA的复制、损伤修复以及细胞周期有关。KIAA0101有两种转录变异体(transcript variant, tv),KIAA0101 tv1参与DNA复制和修复,而tv2功能未见报道。本实验室研究发现tv1的mRNA和蛋白在肝癌细胞系中比癌旁组织中表达量高,并能抑制多柔比星诱导的细胞凋亡;在肝癌细胞系HepG2.2.15中,tv2表达量明显低于tv1,转染 tv2过表达能够下调tv1的mRNA水平。因此,我们推测KIAA0101的两种转录变异体在肝细胞癌的形成和发展过程中起到了不同的作用。 【设计思路】 我们检测发现KIAA0101 tv1和tv2在肝癌组织中的表达有差异,所以我们进行tv1和tv2的生物学活性的比较研究;前期实验发现KIAA0101 tv2能够抑制tv1在HepG2.2.15中的表达,所以我们进行KIAA0101 tv2对tv1的表达及功能的调控研究。 【实验内容】 (1)肝癌组织及癌旁组织、多种肝癌细胞系中KIAA0101 tv1和tv2的表达情况,及其在肝癌细胞系中的细胞亚定位研究;(2)KIAA0101 tv1和tv2生物学活性的比较研究;(3)KIAA0101 tv1和tv2对KIAA0101 promoter的调控研究;(4)KIAA0101 tv2过表达对tv1表达及功能的抑制作用的研究。 【材料】 原发性肝癌组织及癌旁组织,多种肝癌细胞系(HepG2、HepG2.2.15、Huh-7、HCCLM3、BEL7402) 【可行性】 (1)本实验室多年围绕肝癌分子机制及防治方向进行了长期的课题探索,对于KIAA0101基因致原发性肝细胞癌的研究已取得重要进展,成果于2012年发表于Hepatology杂志。(2)本实验室前期实验发现,在肝癌细胞系HepG2.2.15中,KIAA0101 tv2的表达量明显低于tv1,tv2的过表达能抑制tv1的mRNA水平。(3)本实验室具备完成本课题所需的所有仪器,承担并参与了多项国家、省部级项目,专业背景扎实。 【创新性】 (1)关于tv2的功能研究目前尚无报道,而我们实验发现KIAA0101两种转录变异体在肝癌组织表达不同,此研究对于了解肝细胞癌中KIAA0101两种转录变异体的相互作用具有重要意义。(2)我们前期实验发现KIAA0101 tv2过表达能够抑制tv1的mRNA水平,此实验可能为肝细胞癌的分子治疗提供新的思路。 |
| 关键词: 原发性肝细胞癌 KIAA0101 转移变异体 细胞迁移 癌基因活性 |
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