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| 【目的】 建立大孔吸附树脂法富集高纯度穿山龙总皂苷(TSDN)的制备工艺,并考察其抗2型糖尿病(T2DM)的生物学活性及分子机制。 【方法】 (1)采用D101树脂富集TSDN,UV测定粗提物中TSDN含量,HPLC进行主成分定量分析。(2)在TSDN抗T2DM研究中,采用高脂饮食合并STZ(30 mg/kg)诱导T2DM大鼠,选取空腹血糖高于16.7 mmol/L的大鼠随机分为模型组、给药组(200、100和50 mg/kg TSDN)和阳性对照组(10 mg/kg,格列本脲),同时设空白组和单纯给药组(TSDN 200 mg/kg),灌胃给药12周。测定大鼠体重、饮水(饮食)量和尿量来评价TSDN对T2DM大鼠能量代谢的影响;测定空腹血糖、血清胰岛素等评价对T2DM大鼠血糖的影响;测定血脂水平评价对T2DM大鼠血脂的影响;测定自由基水平来考察TSDN的抗氧化能力;测定骨密度、肌酐和尿素氮水平评价对T2DM引起骨和肾损伤的保护作用;同时进行组织病理学分析,并采用ELISA法、real-time PCR和蛋白质印迹法进行分子机制的研究。 【结果】 (1)在TSDN制备中,采用D101大孔树脂用4BV 30%乙醇除杂,12BV 70%乙醇洗脱,产物得率为3.71%,TSDN含量为(87.32±5.7)%,其中原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的含量分别为(12.3±3.4)%、(23.1±1.9)%和(41.2±2.5)%。(2)在TSDN抗T2DM实验中,与模型组相比,不同剂量TSDN均能显著降低T2DM大鼠血糖和血脂水平、饮食(饮水)量;增加大鼠体重、促进胰岛素分泌、改善葡萄糖耐量和胰岛素耐量;组织病理学检查表明TSDN可以增加肝糖原储存,减轻肝损伤;同时,能显著清除过量的自由基,并对T2DM引起的骨和肾脏损伤也有一定的保护作用。进一步结果表明TSDN可降低GSK-3β酶活力,下调TNF-α、IL-6等表达,降低MAPKs 磷酸化水平,上调IRS-1、GLUT-4等表达,并升高GK酶活力。 【结论】 建立的TSDN制备工艺简单可行,产物纯度高。TSDN具有较好的抗T2DM作用,这种作用是通过调节糖异生和糖酵解关键酶的表达、改善脂质代谢、降低氧化应激水平来实现的,本实验为TSDN抗T2DM研究提供了实验依据,也为该天然产物的深入研究和开发奠定了基础。 |
| 关键词: 穿山龙总皂苷 2型糖尿病 氧化应激 |
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