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| 腺病毒介导的血管内皮生长因子体外转染心肌细胞的研究 |
| 张裕东;张宝仁;黄盛东;梅举;吴红萍;李林芳;肖海波;王晓伟 |
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| (第二军医大学长海医院胸心外科,第二军医大学长海医院胸心外科,第二军医大学长海医院胸心外科,第二军医大学长海医院胸心外科,东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,第二军医大学长海医院胸心外科,第二军医大学长海医院胸心外科 上海 200433 ,上海 200433 ,上海 200433 ,上海 200433 ,上海 200438 ,上海 200438 ,上海 200433 ,上海 200433) |
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| 摘要: |
| 目的:构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)基因的重组腺病毒载体,并转染体外培养的心肌细胞,检测VEGF的表达。万法:将人源性的VEGF165 cDNA正向插入到腺病毒载体PDC315,构建重组质粒,通过脂质体共转染293细胞,经同源重组获得携带人VEGF165基因的重组腺病毒,通过PCR扩增法鉴定所构建的腺病毒,扩增并测定滴度后,体外转染培养的心肌细胞,利用ELISA、Western印迹分析等方法检测VEGF在心肌细胞中的表达。结果:人VEGF165cDNA成功地正向插入到PDC315载体中,以重组病毒基因组DNA为模板,同时扩增出了610 bp的VEGF165cDNA基因片段,证实了所构建病毒的正确性,病毒滴度为2.8×108pfu／ml,Ad VEGF165体外转染心肌细胞3 d后,在培养细胞的上清液及细胞内检测到了VEGF的表达。结论:成功构建了表达人VEGF165基因的腺病毒载体,体外转染心肌细胞后能够满意表达VEGF,为基因治疗心肌缺血奠定基础。 |
| 关键词: 血管内皮生长因子 腺病毒 转染 基因疗法 心肌细胞 体外 |
| DOI： |
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