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| 【目的】 研究转移性肿瘤抗原1 (MTA1)在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌发生发展的影响;明确Epstein-Barr病毒编码的潜伏膜蛋白2A (LMP2A)和MTA1的关系及其机制。 【方法】 利用免疫组化检测鼻咽癌和正常鼻黏膜组织中的MTA1蛋白和EMT相关蛋白的表达情况,并结合临床病理特征和EMT相关蛋白进行相关性分析。构建MTA1过表达和干扰表达的鼻咽癌细胞系,蛋白质印迹和transwell实验检测MTA1对鼻咽癌细胞侵袭和EMT发生的影响。通过蛋白质印迹和免疫荧光检测Wnt通路和β-catenin核转位研究MTA1发挥功能的机制。以免疫组化检测鼻咽癌组织中LMP2A和MTA1的相关性,慢病毒技术构建LMP2A表达而MTA1缺失的细胞系,蛋白质印迹和transwell实验检测其侵袭能力和EMT的变化。进而建立裸鼠尾静脉注射和左心室注射模型,体内实验研究MTA1对鼻咽癌转移的影响。使用mTOR下游调控通路4EBP1的抑制剂INK-128和siRNA干扰c-myc表达,研究LMP2A激活MTA1表达的通路机制。 【结果】 免疫组化分析发现MTA1高表达与鼻咽癌TNM分期的N和M分期呈正相关。在鼻咽癌组织中MTA1高表达于癌巢和癌浸润发生部位。MTA1的高表达与E-cadherin表达呈负相关,和Vimentin的表达呈正相关。低表达MTA1的细胞系CNE-1过表达MTA1后,侵袭能力增强,EMT表型增加。高表达MTA1的细胞系CNE-2干扰其表达后,侵袭能力减弱,EMT表型减少。裸鼠左心室注射,CNE-1-MTA1细胞转移能力增强,CNE-2-siMTA1细胞转移能力下降。CNE-1的MTA1过表达促进了Wnt1的表达,促使β-catenin的入核。LMP2A和MTA1的过表达具有正相关性。LMP2A促进了CNE-1和CNE-2细胞系表达MTA1。在LMP2A表达的细胞系中,干扰MTA1的表达能抑制肿瘤侵袭和EMT的发生。动物模型亦显示CNE-1-LMP2A的MTA1表达干扰抑制了肿瘤转移的发生。过表达LMP2A的CNE-1细胞系中mTOR和4EBP1-eIF4E axis通路活化。与Rapamycin相比较,INK-128药物能特异性抑制4EBP1-eIF4E axis的活化,降低CNE-1-LMP2A的侵袭能力、β-catenin的入核及EMT的发生。对C-myc的干扰表达,能部分降低MTA1的表达及CNE-1-LMP2A的侵袭能力。 【结论】 MTA1通过Wnt1通路活化促进了鼻咽癌的转移和EMT发生;LMP2A能激活mTOR和GSK-3β通路,4EBP1-eIF4E axis的活化参与了MTA1 mRNA的稳定性等转录后调控,也参与C-myc对MTA1的转录调控,从而增强鼻咽癌侵袭转移能力并促进EMT发生。 |
| 关键词: 鼻咽癌 潜伏膜蛋白2A 转移性肿瘤抗原1 上皮间质转化 |
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