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| 【目的】 抑癌基因TSC1是mTOR信号通路的负调控因子,TSC1的突变或失活会引起mTOR的异常活化和不受控制的细胞生长和细胞增殖。TSC1在神经胶质瘤、胃癌、结肠癌及卵巢癌等多种恶性肿瘤中表达降低,但具体机制尚不明确。本研究旨在寻找靶向调控TSC1的miRNA,明确其对TSC1及mTOR信号通路的影响,并进一步研究该miRNA在卵巢癌中发生发展过程中的作用。 【方法】 通过生物信息学分析,初步确定候选miRNA,瞬时转染miRNA mimics和inhibitors,通过蛋白质印迹和Luciferase等方法明确靶向调控TSC1的miRNA;蛋白质印迹检测miRNA对mTOR信号通路关键分子表达的影响;建立miRNA过表达和低表达的卵巢癌细胞系,研究miRNA及TSC1对卵巢癌细胞增殖、转化、侵袭能力及化疗敏感性的影响;最后通过动物实验明确靶向调控TSC1的miRNA与卵巢癌发生发展的关系。 【结果】 瞬时转染mir-27、mir-130、mir-204的mimics并检测TSC1的表达,发现转染mir-130的细胞中TSC1表达明显降低,mTOR下游关键蛋白mTOR、p70S6K、4EBP-1的磷酸化水平升高,瞬时转染mir-130 inhibitor后,TSC1含量上调,mTOR、p70S6K、4EBP-1磷酸化水平降低,进一步佐证mir-130靶向调控TSC1,利用收集的卵巢癌及正常组织检测mir-130的表达,显示mir-130在卵巢癌中含量升高。同时我们也成功构建了稳定转染mir-130的细胞系,为后续体内体外实验奠定了基础。 【结论】 Mir-130通过靶向抑制TSC1的表达,使得TSC1/TSC2复合物含量减少,对mTOR的抑制作用减弱,从而使mTOR复合物过度磷酸化,继而磷酸化下游的靶蛋白p70S6K、4EBP-1,促进蛋白的合成,尤其是与细胞周期有关的蛋白,从而促进细胞增殖和耐药等恶性行为。 |
| 关键词: mir-130 TSC1 mTOR信号通路 卵巢癌 |
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